紫外可見分光光度計原理的使用注意事項

　　(1)預(yù)熱是保證儀器準(zhǔn)確穩(wěn)定的重要步驟。

　　(2)比色皿的清潔程度,直接影響實驗結(jié)果.因此,特別要將比色皿清洗干凈.先用自來水將用過的比色皿反復(fù)沖洗,然后用蒸餾水淋洗,倒立于濾紙片上,待干后再收回比色皿盒中.必要時,還要對比色皿進行更精細的處理,如用濃硝酸或鉻酸洗液浸泡,沖洗。

　　(3)比色皿與分光光度計應(yīng)配套使用,否則會引起較大的實驗誤差.比色皿不能單個調(diào)換1.37200型光柵分光光度計的使用注意事項。

　　(4)比色皿內(nèi)盛液應(yīng)為其容量的2/3,過少會影響實驗結(jié)果,過多易在測量過程中外溢,污染儀器.比色皿中試樣裝入量應(yīng)為2/3～3/4之間。

　　(5)拿放比色皿時,應(yīng)持其"毛面",杜絕接觸光路通過的"光面".如比色皿外表面有液體,應(yīng)用綢布拭干,以保證光路通過時不受影響。

　　(6)若待測液濃度過大,應(yīng)選用短光徑的比色皿,一般應(yīng)使吸光度讀數(shù)處于0.1～0.8范圍內(nèi)為宜.由于測定空白,標(biāo)準(zhǔn)和待測溶液時使用同樣光徑的比色皿,故不必考慮因光徑變化而引起的影響。

　　物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會相同，因此，每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)問相互作用的有效手段。

　　此后，紫外可見分光光度計經(jīng)不斷改進，又出現(xiàn)自動記錄、自動打印、數(shù)字顯示、微機控制等各種類型的儀器，使光度法的靈敏度和準(zhǔn)確度也不斷提高，其應(yīng)用范圍也不斷擴大。紫外可見分光光度法從問世以來，在應(yīng)用方面有了很大的發(fā)展，尤其是在相關(guān)學(xué)科發(fā)展的基礎(chǔ)上，促使分光光度計儀器的不斷創(chuàng)新，功能更加齊全，使得光度法的應(yīng)用更拓寬了范圍。目前，分光光度法已為工農(nóng)業(yè)各個部門和科學(xué)研究的各個領(lǐng)域所廣泛采用，成為人們從事生產(chǎn)和科研的有力測試手段。

　　分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團的信息。可以用標(biāo)準(zhǔn)光圖譜再結(jié)合其它手段進行定性分析。

　　根據(jù)Lambert-Beer定律說明光的吸收與吸收層厚度成正比，比耳定律說明光的吸收與溶液濃度成正比；如果同時考慮吸收層厚度和溶液濃度對光吸收率的影響，即得朗伯-比耳定律。即A=εbc，(A為吸光度，ε為摩爾吸光系數(shù)，b為液池厚度，c為溶液濃度)就可以對溶液進行定量分析。

　　將分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質(zhì)，則兩者的光譜圖應(yīng)*一致。如果沒有標(biāo)樣，也可以和現(xiàn)成的標(biāo)準(zhǔn)譜圖對照進行比較。這種方法要求儀器準(zhǔn)確，精密度高，且測定條件要相同。

　　實驗證明，不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強度也不同，這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強度，以確定選擇哪一種溶劑。